מהם התקנים לעיבוד אלקטרופורטי?

מהם התקנים לעיבוד אלקטרופורטי?

העיקרון הבסיסי של אלקטרופורזה הוא שהיא מתייחסת לתהליך של נדידת חלקיקים טעונים תחת פעולת שדה חשמלי. להרבה ביומולקולות חשובות, כמו חומצות אמינו, פפטידים, חלבונים, נוקלאוטידים, חומצות גרעין וכו', יש קבוצות הניתנות למינון שיכולות לשאת מטענים חיוביים או שליליים בערך pH ספציפי. תחת פעולת שדה חשמלי, מולקולות טעונות אלו ינועו לכיוון האלקטרודה המנוגד לקוטביות המטען שלהן.

מיומנות אלקטרופורטית היא היכולת להפריד, לקבוע או לטהר דגימות על ידי ניצול השדה החשמלי, הגורם למולקולות טעונות לנוע במהירויות שונות עקב ההבדלים בתכונות הטעונות של מולקולות שונות בדגימה להפרדה, כמו גם ההבדלים בגודל, צורה ותכונות אחרות של המולקולות עצמן. תהליך האלקטרופורזה צריך להתבצע במדיום תומך. אלקטרופורזה של ממשק חופשי שבוצע על ידי Tiselius et al. בשנת 1937 לא היה תומך קבוע, ולכן הפיזור וההסעה היו חזקים יחסית, והשפיעו על אפקט ההפרדה. אז הוא מציג אלקטרופורזה עם תומך קבוע, שבו הדגימה עוברת תהליך אלקטרופורזה במדיום קבוע, ומפחיתה את ההפרעות של פיזור והסעה.

האמצעים התומכים הראשוניים היו נייר סינון וממברנת תאית אצטט, שכיום נעשה בהם שימוש פחות נפוץ במעבדות. במשך זמן רב, חומרים מולקולות קטנות כגון חומצות אמינו, פפטידים, סוכרים וכו' הופרדו ונותחו בדרך כלל על ידי אלקטרופורזה באמצעות נייר סינון או לוחות שכבה דקה של תאית או סיליקה ג'ל כמדיה. עם זאת, כיום, בדרך כלל משתמשים בטכניקות פעילות יותר כמו HPLC לניתוח. מדיות אלו מתאימות להפרדת חומרים מולקולות קטנות, בהפעלה פשוטה ונוחה. עם זאת, השפעת ההפרדה של ביומולקולות מופרעות היא גרועה יחסית. הכנסת ג'ל כמדיום תומך קידמה מאוד את הפיתוח של מיומנויות אלקטרופורזה, מה שהופך את מיומנויות האלקטרופורזה לאחת הטכניקות החשובות לניתוח מקרומולקולות ביולוגיות כגון חלבונים וחומצות גרעין.

עיבוד אלקטרופורטי הוא לא קשה, אבל אנחנו צריכים גם לדעת שיש תקנים מסוימים לעיבוד אלקטרופורטי, אחרת אנחנו לא יודעים אם האיכות מתאימה. אז מה הם הסטנדרטים לעיבוד האלקטרופורטי הזה?

1. משטח חלק

זהו תנאי בסיסי, אם המשטח אינו חלק, אז ההסמכה הבסיסית אובדת;

2. עובי אחיד

עיבוד אלקטרופורטי מחייב הבטחת עובי אחיד כדי למנוע הבדלי צבע להופיע;

3. אין סדקים ברורים על פני השטח